Visible and rapid detection of feline chaphamaparvovirus using multienzyme isothermal rapid amplification and lateral flow dipstick assay

发表单位：河南省动物疫病诊断与综合控制工程技术中心

发表期刊：Frontiers in Cellular and Infection Microbiology

影响因子：4.6

（点击底部"阅读原文"，查看文章）

猫查帕哈马病毒(FeChPV)是一种新型细小病毒，2019年首次在加拿大腹泻猫群中被发现。该病毒致病性和分子特征仍不明确，并存在宿主与遗传多样性，需要进一步的流行性病学调查。现在尚无 FeChPV 检测的标准化方法。

多酶恒温快速核酸扩增-侧向流试纸条法（MIRA-LFD）已成功用于多种病毒的检测，具有快速简便、无需精密仪器等优势。研究团队建立适用于 FeChPV 的 MIRA-LFD 检测方法，解决基层临床检测难题。在不依赖精密仪器的情况下，利用MIRA-LFD方法在37℃下在20min内完成了对FeChPV的检测，并与其他病毒没有任何交叉反应。检测限为32.3copies/μL，高于PCR方法10倍。此外，MIRA-LFD方法在417只腹泻猫中检测到29份FeChPV阳性样本，阳性率略高于巢式PCR方法。这些结果表明，建立的检测FeChPV的MIRA-LFD方法是一种高效、经济、可靠、简便的方法，有助于FeChPV感染的早期预防和控制。

临床样本：本研究使用的直肠拭子样本采集自2022至2024年间广东省、河南省、安徽省、浙江省及内蒙古自治区宠物医院的632只猫（其中417只患有腹泻，115只健康猫）和474只犬（其中342只患有腹泻，132只健康犬）。

核酸扩增：将提取好的DNA核酸加入至MIRA体系中，重组酶和引物形成复合体；在辅助蛋白和单链结合蛋白的帮助下，侵入双链 DNA 模板，引物与同源互补区域结合形成 D-loop 区域，同时重组酶从复合体解体；聚合酶结合到引物的 3’末端并启动 DNA 合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。这个过程迅速高效地循环，从而完成目的片段超快速扩增，仅需15min。

试纸条显色：将核酸扩增产物1:10稀释后滴加至试纸条上，5min后读取结果。

整个核酸扩增至试纸条显色仅需20min。

实验中使用了K8凯发国际生物产品：

根据琼脂糖凝胶电泳的结果，扩增5、10、15和20min均可以扩增出目的条带，扩增15min目的条带强度达到峰值，该项目的最佳反应时间为15min。36℃、37℃、38℃、39℃和40℃扩增均能扩增出目的条带，其中39℃扩增的目的条带最明亮，该项目的最佳反应温度为39℃。

2.检测性能

灵敏度：

（图A：MIRA使用琼脂糖凝胶电泳进行结果呈现）

（图B：巢式PCR使用琼脂糖凝胶电泳进行结果呈现）

（图C：MIRA使用核酸试纸条进行结果呈现）

将样本从3.23×10⁶ copies/μL开始进行10倍梯度稀释。其中，巢式PCR使用琼脂糖凝胶电泳可稳定检出3.23×10²copies/μL；MIRA使用琼脂糖凝胶电泳、使用核酸试纸条都可稳定检出3.23×10¹copies/μL。

MIRA方法学使用两种不同结果呈现方式灵敏度一致，MIRA方法灵敏度优于巢式PCR。

特异性：

（1:FeChPV, 猫查帕哈马病毒；2:FPV, 猫泛白细胞减少症病毒；3:FeAstV,猫星状病毒；4:FBoV,猫博卡病毒；5:CachaV,犬查帕病毒；6: negative control）

新建立的MIRA-LFD方法只检测到FeChPV，与其他参考病毒没有交叉反应，表明其具有良好的特异性。

该研究建立了检测FeChPV的MIRA-LFD方法，而不需要高精度的仪器。MIRA-LFD检测方法作为一种高效、经济、可靠的检测方法，具有较高的敏感性和特异性，更适合于临床检测，为FeCHPV的早期预防和控制给予技术支持。

除了上图系列现场快检产品，K8凯发国际生物还给予：

科研原料：给予用于基础科研研究的试剂原料与技术支持，以及项目文献参考。

OEM生产：拥有全流程自主生产高纯度高活性成品的能力，实现工业化量产。

项目委托开发：序列信息与序列比对分析结果、项目引物探针设计与合成、项目质粒合成与样本、项目报告和结果等。

更多信息，欢迎咨询

扫码添加客服微信

商务洽谈电话

18068763522